Elisa试剂盒组件

试剂盒组件外所需器材和试剂

1. 酶标仪(波长450nm滤光片)

2. 37°C恒温箱(不推荐使用细胞用CO2培养箱)

3. 自动洗板机或多道移液器/5ml滴管(手工洗板用)

4. 精密的单道(0.5-10μL, 5-50μL, 20-200μL, 200-1000μL)和多通道移液器(移液器使用前需校准)。

5. 无菌的EP管及一次性吸头

6. 吸水纸及加样槽

7. 去离子水或蒸馏水

操作步骤概要

• 步骤1：向孔中加入100ul标准品或待测样品，贴上覆膜， 37°C静置孵育90分钟。

• 洗板：洗板2次。不浸泡。

• 步骤2：加入100ul生物素-抗体工作液，贴上覆膜， 37°C静置孵育60分钟。

• 洗板：洗板3次。每次浸泡1分钟。

• 步骤3：加入100ul HRP-链霉亲和素(SABC)工作液，贴上覆膜， 37°C静置孵育30分钟。

• 洗板：洗板5次。每次浸泡1分钟。

• 步骤4：添加90ul TMB显色底物。贴上覆膜， 37°C静置孵育10-20分钟(请使用TMB显色精准控制方法)。

• 步骤5：添加50ul反应终止液。立即在450nm处读取OD450值并计算。

标准曲线

本产品经品管部检测，符合使用手册的性能要求。(实验室湿度为20%-60%，温度为18°C -25°C。显色前将TMB平衡至37°C，加酶标板孔后，37°C避光孵育15分钟。)

因具体实验环境及操作存在差异，以下实验数据和标准曲线仅供参考，实验人员需根据自己的实验建立标准曲线。

STD.(pg/ml)	OD-1	OD-2	Average
0	0.142	0.149	0.145
15.625	0.187	0.197	0.191
31.25	0.246	0.258	0.251
62.5	0.302	0.317	0.308
125	0.422	0.444	0.431
250	0.746	0.784	0.761
500	1.256	1.32	1.281
1000	2.05	2.154	2.092

回收率

将一定含量的TNF-α加入样本中，并通过将测量值与样品中TNF-α的预期量进行比较来计算回收率。

线性度

将添加有适当浓度TNF-α的样品分别稀释2倍、4倍、8倍来检测，得出回收率范围。

精密度（%）

板内精密度：低、中、高浓度样本分别在同1块酶标板上检测20次。

板间精密度：低、中、高浓度样本分别在3块酶标板上检测20次。

稳定性

未拆封的试剂盒在37°C和2-8°C进行稳定性实验，得出稳定性数据。